Seguem algumas dicas:
Sempre que ajustar a curva padrão, é importante que a metodologia aplicada gere uma linha de movimento que esteja uniforme com a curva padrão. Em geral, o valor r2 da linha de tendência deve ser 0,99 ou superior para garantir resultados precisos. Ajustar os dados em Linha reta normalmente fazem com que erros aconteçam e com isso os cálculos saem errados, principalmente nas bordas da faixa de concentração. Vejam a ilustração abaixo:
Existem softwares que geram curvas logicas de quatro parâmetros (4-PL), e é recomendável sempre usa-los, pois nem todas as curvas são em linha reta, existem bons softwares de ajuste de curva disponíveis on line em sites como ELISAAnalysis.com, que disponibilizam versões free para uso.
A melhoria significativa no ajuste da curva é destacada na tabela abaixo. Visivelmente, o mau ajuste da linha de tendência linear (r2 = 0,9567) levou a erros importantes, principalmente nas seções média e inferior da curva padrão.
Diferentemente, a linha inclinada 4PL desenvolveu concentrações de analitos que estão de acordo com valores conhecidos.
Outra possibilidade é traçar uma curva de melhor ajuste através da porção linear da curva padrão e sobreponha uma linha de tendência linear. Geralmente, isso é conseguido retirando um ou mais dos pontos padrão mais altos, pois altas concentrações de analito podem levar à saturação do ensaio e a uma estabilização resultante da curva padrão.
Uma vez que o valor r2 de 0,99 é alcançado, a equação resultante exibida no gráfico pode então ser usada para calcular as concentrações desconhecidas, solucionando para x.
Outra forma é fazer transformações linearizantes. Basicamente, isso envolve a transformação (geralmente log ou ln) de uma ou ambas as variáveis para gerar uma linha reta na qual uma linha de tendência linear pode ser usada.
Independentemente do método que você estiver usando, sempre confirme se a linha de tendência resultante ofereça um valor de R2 de pelo menos 0,99.
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