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Seguem algumas dicas:

Sempre que ajustar a curva padrão, é importante que a metodologia aplicada gere uma linha de movimento que esteja uniforme com a curva padrão. Em geral, o valor r2 da linha de tendência deve ser 0,99 ou superior para garantir resultados precisos. Ajustar os dados em Linha reta normalmente fazem com que erros aconteçam e com isso os cálculos saem errados, principalmente nas bordas da faixa de concentração. Vejam a ilustração abaixo:

 

Existem softwares que geram curvas logicas de quatro parâmetros (4-PL), e é recomendável sempre usa-los, pois nem todas as curvas são em linha reta, existem bons softwares de ajuste de curva disponíveis on line em sites como ELISAAnalysis.com, que disponibilizam versões free para uso.

A melhoria significativa no ajuste da curva é destacada na tabela abaixo. Visivelmente, o mau ajuste da linha de tendência linear (r2 = 0,9567) levou a erros importantes, principalmente nas seções média e inferior da curva padrão.

Diferentemente, a linha inclinada 4PL desenvolveu concentrações de analitos que estão de acordo com valores conhecidos.

Outra possibilidade é traçar uma curva de melhor ajuste através da porção linear da curva padrão e sobreponha uma linha de tendência linear. Geralmente, isso é conseguido retirando um ou mais dos pontos padrão mais altos, pois altas concentrações de analito podem levar à saturação do ensaio e a uma estabilização resultante da curva padrão.

Uma vez que o valor r2 de 0,99 é alcançado, a equação resultante exibida no gráfico pode então ser usada para calcular as concentrações desconhecidas, solucionando para x.

Outra forma é fazer transformações linearizantes. Basicamente, isso envolve a transformação (geralmente log ou ln) de uma ou ambas as variáveis ​​para gerar uma linha reta na qual uma linha de tendência linear pode ser usada.

Independentemente do método que você estiver usando, sempre confirme se a linha de tendência resultante ofereça um valor de R2 de pelo menos 0,99.